檢測胱抑素CElisa試劑盒標(biāo)本時(shí)要注意的事情
點(diǎn)擊次數(shù)：799次 更新時(shí)間：2019-11-13
在檢測胱抑素CElisa試劑盒標(biāo)本時(shí)，需要仔細(xì)認(rèn)真，在遇到問題時(shí)冷靜對待。總結(jié)了以下幾點(diǎn)需要注意：
1、本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。
保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。
4、反復(fù)凍融會使蛋白效價(jià)降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線平直，一般有以下原因：標(biāo)準(zhǔn)曲線制備是否不當(dāng)，洗孔不凈，吸孔不充分，讀數(shù)不準(zhǔn)確或是吸量誤差。查找原因，即可找到相應(yīng)解決方案。
檢測目的是為實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確可靠定量分析實(shí)驗(yàn)依據(jù)。為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制。
胱抑素CElisa試劑盒操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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